为什么我的原核表达载体没有表达目的蛋白？

表达菌株不合适

表达载体在不适当的宿主菌株中可能无法进行诱导表达。VectorBuilder大多数载体的克隆宿主菌株都是Stbl3（具体详看载体报告）。Stb13能够保持质粒的稳定性，是优选的克隆宿主，但它可能不适用于重组蛋白表达。例如，对于pET载体，IPTG诱导的重组蛋白表达需要含有T7 RNA聚合酶的宿主菌株，而Stbl3却没有。因此，原核细菌表达载体通常需要将质粒转移到合适的宿主菌如BL21（DE3）中进行诱导表达。

载体上表达的蛋白“有问题”

有时候，当表达的蛋白是非溶性的，或折叠错误，不当切割或对细菌宿主有毒性时，目的蛋白往往不能正常诱导表达。在这种情况下，您需要优化诱导条件（详见下文），或者替换成更耐受的宿主菌株或更换表达载体类型。

诱导条件有待优化

根据待表达基因，表达载体和宿主菌株等因素，您可能需要考虑优化以下诱导条件：OD₆₀₀（通常为0.6-0.8）；诱导剂（如IPTG或L-阿拉伯糖）的浓度不能太低或太高；诱导持续时间不能太短或太长；诱导温度，特别是在处理“有问题”蛋白时（见上文），可以测试不同的温度梯度（如16°C，25°C，30°C，37°C等）。在极少数情况下，由于原因不明，相同表达载体的不同克隆可能会表现出不同的表达能力，因此您可能需要挑选多个单菌落进行单独测试，以筛选出具有最佳诱导效果的克隆。

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