云舟生物可为您构建具有极小的背景表达且高水平诱导目的基因表达的Tet诱导基因表达细胞稳转株。此外，我们可以设计表达Tet调控蛋白（如 rtTA、tTS/rtTA、tet3G 等）的细胞稳转株。用携带TRE启动子驱动的GOI的病毒/质粒转导/转染这些细胞，可以灵活进行实验设计并可靠地 实现Tet诱导基因表达。对于Tet-On细胞稳转株，其目的基因的诱导表达效果经过RT-qPCR 进行验证。每批细胞产品放行前，我们还会开展一系列QC试验，比如无菌测试、支原体检测等。
亮点：
图1 Tet诱导基因表达细胞稳转株的构建流程。
| 服务 | 交付内容 | 价格(CNY) | 周期 |
|---|---|---|---|
| Tet诱导基因表达细胞稳转株构建 | 多克隆细胞群（>106个细胞/管，2管） | ￥18,980起 | 8-11周 |
| 单克隆细胞株（>106个细胞/管，每个克隆各2管） | ￥21,980起 | 13-16周 |
* 增加交付单克隆数将收取额外费用。
| 试验项目 | 方法 |
| Tet诱导基因表达验证（默认） | RT-qPCR |
| 表达测试（额外收费） | WB、IF、FACS |
| 无菌测试（默认） | PCR检测支原体、生物负荷检测等 |
图2 在293T细胞中使用Tet系统诱导表达EGFP。TRE启动子驱动表达EGFP的慢病毒转导稳定表达tTS/rtTA的293T细胞，MOI=1。针对有添加四环素（Dox+）和不添加四环素（Dox-）的EGFP表达效果进行检测：（A）荧光显微镜观察。（B）流式细胞术检测。（C）转导后24 h和48 h进行western blot。MFI：荧光强度中值。
四环素（Tet）诱导基因表达系统是控制哺乳动物细胞基因表达的有力工具。我们的Tet-On载体系统在没有四环素的情况下可实现GOI几乎完全沉默，而在添加四环素时GOI快速且高水平表达。该系统包含多个组分， 其中tTS蛋白在无四环素的情况下主动沉默GOI，rtTA蛋白在四环素存在的情况下强烈激活GOI表达。在没有四环素的情况下，TetR（Tet阻遏蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白的转录阻遏结构域）融合产生的tTS蛋白与TRE启动子结合，主动抑制基因转录。另一方面，rtTA 蛋白是一种 rTetR（一种突变型 Tet 阻遏蛋白）和 VP16（单纯疱疹病毒蛋白16的转录激活子结构域）的融合蛋白，仅在四环素存在的情况下与 TRE 启动子结合以激活基因转录。我们的Tet-Off载体系统在四环素存在的情况下可通过tTA蛋白与TRE启动子的结合来抑制靶基因表达。
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