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IVT saRNA制备

自扩增RNA(saRNA)具有RNA分子自我扩增的能力,其表达量比传统mRNA更高,表达时间也更长。这种能力是通过在RNA结构中整合病毒序列(编码复制酶和复制子元件)来实现的,并促使RNA以RNA依赖的方式自我复制。由于saRNA产生显著免疫反应所需的剂量远低于mRNA,该项技术正迅速被应用于下一代RNA疫苗的研发,此外,saRNA还是蛋白替代疗法中的一种非常有潜力的药物候选。saRNA的序列优化和生产过程与mRNA类似。云舟生物专门从事各种应用的高质量saRNA的设计和生产。

亮点
fast-TAT-from-cloning-to-LNP-encapsulation

从载体克隆到LNP封装快至5周

sequence optimization

独有的序列优化技术,提升表达水平

Experts-in-RNA-development

高度专业的团队为你的saRNA进行设计与优化,以取得最佳的表达量、产量和质量

服务详情
  • 预制saRNA产品
  • 治疗性IVT RNA开发:IVT载体设计和克隆、IVT RNA生产和纯化
  • LNP封装:标准配方、定制配方、抗体偶联LNP
  • CDMO服务:工艺开发、GMP生产、灌装
技术详情
saRNA复制机制

saRNA的自扩增能力依赖于其第一个开放阅读框编码的复制酶。如图1所示,从saRNA中翻译出的非结构蛋白(nsP)基因,其序列来源于甲病毒(Alphavirus),可形成多蛋白复制复合物(复制酶)负责RNA复制。其中,nsP1具有甲基转移酶和鸟嘌呤转移酶活性,扮演加帽酶的角色,而nsP2则是一种RNA解旋酶,并具有三磷酸酶活性。nsP3介导蛋白质-蛋白质相互作用。nsP4是一种RNA依赖的RNA聚合酶。复制酶复合物合成作为下游RNA复制模板的全长负链RNA。此外,保守序列元件(CSE)被放入转基因的5' 和3' 非翻译区(UTR),以实现复制酶介导的转基因扩增和转录。

由于复制酶基因的加入增大了的分子长度,saRNA在体外通常比传统mRNA更难生产。特别是对于一条高效的saRNA生产线,确保产物的高一致性和高质量是极具挑战性的。云舟生物对saRNA生产线投入了大量研发资源,该生产线还可以根据您的项目需求进行调整和定制。

图1 saRNA的复制机制。

试验验证

图2 表达EGFP的saRNA与mRNA转染HEK293T的效果对比。

图3 体内试验表明,saRNA相对mRNA表现出更长的表达时长。30 ug LNP封装的FLuc mRNA与10 ug LNP封装的FLuc saRNA对比表达效果,传统mRNA在48 h后无法检测到表达,而saRNA在肌肉注射后的表达可维持至少8天。

不同类型IVT RNA的比较
mRNAcircRNAsaRNA
结构线性分子,通常包含5’ 帽子、5’ UTR、GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴环状分子,通常包含IRES元件和GOI的ORF线性分子,通常包含5’ 帽子、5’ UTR、复制酶和GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴
帽子需要5’ 帽子维持RNA稳定性并招募核糖体没有帽子结构,采用IRES元件招募核糖体需要5’ 帽子维持RNA稳定性并招募核糖体
RNA长度(nt)100 ~ 10,0001,000 ~ 5,0007,000 ~ 10,000
稳定性相对低相对低
是否可以在生产时引入修饰核苷?通常不添加修饰
表达水平相对低
表达时长相对短
免疫原性相对低
文档

使用说明书

IVT mRNA的体外应⽤

LNP-mRNA的体内应用

手册与宣传单

RNA:从设计到疗法

mRNA基因递送解决方案

EGFP与HiExpress萤火虫荧光素酶IVT mRNA

MSDS

RNA

LNP-mRNA

品质检验证书(COA)

检索COA
载体设计
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