云舟生物提供用于RNA和质粒基因递送的脂质纳米颗粒(LNP)封装服务。我们制备的高均一度LNP可达到很高的封装效率。此外,我们还可以通过制备抗体偶联的LNP或优化LNP配方来提高LNP的基因递送效率和靶向性。如果您需要规模化生产LNP-RNA药物,请查看我们的CDMO服务。
亮点
- 标准配方(SM102、ALC-0315、MC3)或自定义配方
- 从载体克隆到LNP封装快至5周
- 可封装多种类型的RNA/DNA分子,包括mRNA、saRNA、Cas9 mRNA/sgRNA混合物、circRNA、pDNA等
- 高封装效率(可达100%)
- 多分散指数低(PDI <0.1)
- 可制备抗体偶联的LNP
质量控制
云舟生物提供多种QC方法检测RNA和质粒的LNP封装质量。
性质 | QC试验 | 科研级 | GMP-like |
外观 | 目视检测 | √ | √ |
浓度 | RiboGreen试验 | √ | √ |
封装效率 | RiboGreen试验 | √ | √ |
粒径 | 动态光散射(Zetasizer) | √ | √ |
多分散指数(PDI) | 动态光散射(Zetasizer) | √ | √ |
表明电荷(Zeta电势) | 动态光散射(Zetasizer) | √ | √ |
封装的RNA完整性 | 毛细管电泳(CGE) | 可选 | √ |
内毒素 | 动态显色法(KCA) | 可选 | √ |
pH | pH试纸 | 可选 | √ |
无菌性 | 生物负荷测试 | 可选 | √ |
LNP-mRNA数据
- TEM
- PDI和Zeta电势
冷冻透射电子显微镜(cryo-TEM)结果显示我们封装的LNP-mRNA结构完整且大小均一。
![LNP mRNA profile_TEM.png LNP mRNA profile_TEM](https://s.vbapp.net/ea86b237d7614d6cffb1299ce093ab5c756eaf42/Cryo-TEM%20LNP-mRNA.png)
图1 冷冻透射电子显微镜(cryo-TEM)视野下的LNP-mRNA。LNP保存于-80℃含有蔗糖的Tris溶液(pH7.4),冰上解冻后拍摄。比例尺=100 nm。
动态光散射(DLS)分析表明我们的LNP-mRNA可以达到很低的PDI值(PDI<0.1)。云舟生物承诺我们的LNP-mRNA的Zeta电势范围在-10 mV至+10 mV之间。
![LNP PDI and zeta potential.jpeg LNP PDI and zeta potential QC data](https://s.vbapp.net/f100af8a9c1c0c15f978836e340a4649550eea50/blob)
图2 LNP粒径和Zeta电势分析多分散指数(PDI)。(A)和Zeta电势(B)通过动态光散射(DLS)测定。该方法可以测量粒子运动带来的散射光强度的波动变化。反映的则是样本中的粒子尺寸的异质性。样本中的Zeta电势范围在-1.872到+1.872 mV之间。
LNP-RNA功能验证
- LNP-mRNA体外表达
- LNP-mRNA体内表达
- LNP转染一级T细胞
![EGFP LNP-mRNA expression validation in vivo.jpg](https://s.vbapp.net/fb877cfc47b6e344a4a2670c369491b81372faf3/EGFP%20LNP-mRNA%20in%20vitro%20validation.jpg)
图3 使用LNP高效递送mRNA。对比使用传统转染试剂,LNP封装的EGFP mRNA表现出更高递送效率。向Jurkat和293T细胞转染1 ug的EGFP mRNA: (A)流式细胞术分析EGFP表达水平。(B)转染后24 h拍摄细胞荧光图片。实验中使用的EGFP mRNA均无核苷修饰。 荧光强度中值表示为MFI。
![LNP-mRNA expression validation in vivo.jpg](https://s.vbapp.net/d94034cbfd297924d32e423c2c108e907a47a9d4/LNP%20mRNA%20expression%20validation%20in%20vivo.png)
图4 鼠转导萤光素酶mRNA(Luc mRNA),检测mRNA表达情况和免疫反应。(A)注射后6 h、24h、和48 h通过活体成像检测萤光素酶活性。 (B)为量化外源RNA在小鼠中引发的炎症反应,注射后48小时检测小鼠血清中两种促炎细胞因子IL-6和TNF-α的浓度。 误差线表示标准偏差。小鼠种系:C57BL/6J;小鼠年龄:8周;注射方法:肌肉注射。(C)向Balb/C小鼠注射30 ug的LNP封装的mRNA,注射后14天,分离Balb/C小鼠的脾脏细胞,针对病毒抗原A、病毒抗原B以及PBS对照进行IFN-γ ELISpot试验。
![Transfection of primary T-Cells with EGFP mRNA](https://s.vbapp.net/8fd541d6a69285adfc0f269848345654c632907c/Transfection%20of%20primary%20T-Cells%20with%20EGFP%20mRNA.jpg)
图5 EGFP mRNA转染一级T细胞。(A)转染后24小时,流式细胞术测定表达EGFP的细胞数。无处理对照(NC)、商业转染试剂封装的mRNA、以及LNP封装的mRNA均分别转染了一级T细胞。(B)通过流式细胞术测量的EGFP阳性细胞的百分比(灰色)和经过量化的对应的中位荧光强度(黑色)。
LNP优化
- 抗体偶联的LNP
- 配方优化
- 新型配方
![Antibody conjugated LNP-mRNA.jpg](https://s.vbapp.net/ea40d94be05284500a00cdcbffcff635e6cfc196/Anti-CD31%20conjugated%20firefly%20luciferase%20LNP-mRNA%20showed%20improved%20luciferase%20expression%20in%20lung.png)
图6 表达萤火虫荧光素酶(FLuc)的LNP-mRNA在偶联anti-CD31抗体后在肺部的表达效率提升。小鼠品系:C57BC/6J ;小鼠年龄:6-8周;小鼠性别:雌性;注射途径:尾静脉注射;对照:IgG2a偶联的Fluc-mRNA。
![Formulation optimization.png Formulation optimization](https://s.vbapp.net/11fdd9356e0beb49fe1f5354cec8e5e5be7d62e1/Formulation%20optimization.png)
图7 LNP配方优化可提高质粒体外转染效率。(A)表达EGFP的质粒(pDNA-CMV>EGFP)分别采用SM102和ALC-0315两种LNP封装,转染HEK293T细胞。转染后24 h拍摄EGFP荧光图像。(B)基于SM102优化的配方可以获得相较于商业化PEI转染试剂高约6.6倍的转染效率。该实验中的质粒(pDNA-CMV>Fluc)表达萤火虫荧光素酶报告基因。
![Novel formulation Novel formulation](https://s.vbapp.net/0cb68e6dba47bea1837d43c4798091d97e6c19b5/Novel%20formulation.png)
图8 采用云舟生物新型LNP配方封装萤火虫荧光素酶报告基因表达质粒(pDNA-CAG>Luc+),按照0.6 mg每千克体重静脉注射小鼠。注射后96 h观察萤火虫荧光素酶报告基因表达情况。
文档
使用说明书
IVT mRNA的体外应⽤
LNP-mRNA的体内应用
手册与宣传单
RNA:从设计到疗法
mRNA基因递送解决方案
EGFP与HiExpress萤火虫荧光素酶IVT mRNA
MSDS
RNA
LNP-mRNA
品质检验证书(COA)
检索COA