基因诱导表达解决方案

定制Tet调控表达载体

云舟生物提供多种定制Tet载体，可将四环素诱导型基因表达盒有效地递送到靶细胞中。使用我们高度直观的在线载体设计平台，您可以从数量众多的载体骨架（非病毒、病毒或转座子）和载体元件（启动子、ORF、荧光和药筛标记）的无限组合中进行搭配选择，以定制您的目的基因Tet调控表达载体。

将CRISPR载体添加到您的购物车时，您还可以在其下游服务购买质粒DNA制备、RNA制备和病毒包装。

常用Tet调控表达载体

云舟生物提供一系列常用的Tet调控表达载体，既包含一体化载体也包含双载体系统。将这些Tet载体添加到购物车时，您还可以购买质粒DNA制备和病毒包装作为下游服务。

一体化载体系统（Tet-on）

注意：如果您需要Tet-On慢病毒载体，请发送设计咨询给我们。

TRE驱动目的基因表达

Tet调控蛋白表达

如果您未能找到您需求的Tet载体，请发送设计咨询给我们，我们将为您提供专业的技术支持服务。

Ter载体的病毒包装

云舟生物可提供各种规模的慢病毒、AAV 和腺病毒的优质病毒包装服务，可高效地将Tet诱导型基因表达系统递送到难转染细胞中。我们的病毒包装使用我们专有的技术和自我研发的试剂，大大改进了产毒的滴度、纯度、活性和一致性。我们的包装方案还会针对我们的载体构建服务中使用的病毒载体系统进行优化。

点击了解慢病毒包装服务 

点击了解AAV病毒包装服务 

点击了解腺病毒包装服务 

点击了解更多类型的病毒包装  

目的基因Tet诱导表达细胞稳转株

云舟生物可以定制并构建Tet诱导表达细胞稳转株，这些细胞只有极低的背景表达，并且可以高水平诱导表达您的目的基因。此外，我们可以构建tTS/rtTA表达细胞株，然后用携带TRE启动子驱动表达目的基因的质粒/病毒进行转染/转导该细胞，可灵活适应不同的实验方案并带来可靠的基因诱导效果。对于Tet-On细胞稳转株，目的基因的诱导表达水平经过RT-qPCR验证。此外，我们在交付最找的细胞株产品前，还会进行一系列标准QC检测，例如无菌检测和支原体检测。

点击此处查看更多我们的细胞稳转株详情 

四环素（Tetracycline）诱导基因表达

四环素诱导基因表达系统是在哺乳动物细胞中控制目的基因表达时机的强大工具（图1）。我们提供Tet-On和Tet-Off两种调控系统，以帮助您实现对目的基因高度特异的、且依赖四环素剂量的调控表达。 我们的Tet-On载体系统旨在用于当没有四环素存在的情况下，针对目的基因实现其表达背景的完全沉默，并可在添加四环素时诱导其强烈、快速的表达。这是通过一个多元件系统来实现的，该系统结合了在没有四环素的情况下tTS蛋白可进行主动沉默表达和在四环素存在的情况下rtTA蛋白进行强力激活表达的双重机制。在没有四环素的情况下，作为TetR（Tet阻遏蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白的转录阻遏结构域）融合产生的tTS蛋白与TRE启动子结合，导致基因转录被主动抑制。另一方面，rtTA蛋白，作为一种rTetR（突变的Tet阻遏物）和VP16（单纯疱疹病毒病毒体蛋白16的转录激活子结构域）的融合蛋白，当四环素的存在时其与TRE启动子的结合则可以激活基因转录。我们的Tet-Off载体系统可用于在当四环素存在的情况下，通过tTA蛋白与TRE启动子的结合，对靶基因实现调控性的抑制表达。

图1 Tet-On和Tet-Off系统调控基因表达（Dox：多西环素，一种四环素类似物）

通过Tet系统诱导表达目的基因在一系列基因诱导表达方式中具有广泛的优越性，这些特点可被总结为下表：

一体化（All-in-one）载体与双载体系统

为了实现四环素调控的目的基因激活或抑制表达，靶细胞必须同时共表达由TRE启动子驱动的GOI和Tet调节蛋白（tTA、tTS和/或rtTA）。这可以在一体化载体中同时表达目的基因和Tet调控蛋白，或者通过使用双载体系统——目的基因和Tet调控蛋白各自在独立的载体上表达来实现。一体化载体的优势在于，它可以使用单一载体将Tet调控基因表达系统所需的所有成分直接递送至细胞。在双载体系统中，实现目的基因和Tet调控蛋白在靶细胞共表达需要用两种质粒/病毒对靶细胞进行共转染/共转导，而这在技术上更具挑战性，因为并非所有靶细胞都会成功转染/转导两种质粒/病毒。使用双载体系统的另一种方式是用携带目的基因的质粒/病毒转染/转导已经稳定表达Tet调控蛋白的细胞或生物体。然而，这种方法的问题在于相当费时费力。双载体系也有一定的优势，它可以灵活使用表达相同的Tet调控蛋白的质粒、病毒或细胞系去搭配多种不同的目的基因表达质粒/病毒。

组织特异性的Tet诱导表达

云舟生物提供两种类型的一体化Tet-On载体系统：标准形式和低泄漏形式，以帮助您实现目的基因的组织特异性诱导表达。对于标准的Tet-On载体系统，作为融合蛋白的tTS和rtTA其表达使用用户选择的组织特异性启动子进行驱动，而低泄漏Tet-On载体系统则使用广泛启动子来驱动tTS表达，同时使用用户选择的组织特异性启动子驱动rtTA表达。低泄漏形式的载体设计具有特别的优势：在无四环素的情况下最大限度减少非靶组织中的泄漏表达，同时允许在四环素存在的情况下对目的转基因进行组织特异性诱导表达。

试验验证

与通常的仅依赖rtTA的Tet-On载体系统在非诱导的情况下具有显着的渗漏表达的情况不同，我们的表达tTS/rtTA的Tet-On载体系统是一个真正的利用四环素作为开关来调控基因表达的系统，可以最大限度地减少非诱导时的背景表达，并且在四环素诱导时的具有相当高的灵敏度和高的动态范围（图2）。在无四环素的情况下，tTS蛋白与TRE启动子结合，从而主动抑制基因转录，从而最大限度地减少背景表达。另一方面，rtTA蛋白仅在四环素存在的情况下与TRE启动子结合以激活基因转录。

- Dox+ Dox

rtTA
tTS/rtTA

图2 向HEK293T细胞转染以下载体：表达EGFP和rtTA的一体化载体（Tet-On）（上）、表达EGFP和tTS/rtTA的一体化载体（Tet-On）（下）。转染后48小时，对添加多西环素（+Dox）和不添加多西环素（-Dox）的细胞分别检测EGFP表达。

对于使用慢病毒递送方式的Tet载体系统，我们通常不建议使用一体化的载体设计。根据我们的内部数据和许多客户的反馈，使用一体化载体设计的慢病毒的其基因诱导表达效率取决于具体实验并且通常不能令人满意。一体化的载体通常包含两个基因表达盒：由TRE启动子驱动的目的基因表达盒和Tet调控蛋白（如tTA、tTS和/或rtTA）表达盒。对于慢病毒载体，携带多个基因表达盒有时会出现问题，因为正确包装病毒的生物学要求与不同表达盒独立表达的需求之间可能存在冲突。在慢病毒载体上，内部核苷酸多腺苷化信号不能放置在两个LTR之间，因为这会阻断病毒包装过程。因此，由上游启动子启动的转录不会在上游ORF的末端停止，而且会进一步通过转录启动子和ORF，这会导致下游ORF的表达发生部分抑制。在一体化慢病毒载体中，由于Tet调控蛋白位于目的基因下游，它们的表达会大大降低，从而导致泄漏表达和诱导效率低下等问题（图3）。

- Dox+ Dox

Dual
All-in-one

图3 使用双载体（Dual）系统和一体化（All-in-One）载体系统的Tet-On慢病毒转导HEK293T细胞表达EGFP。对于双载体系统，TRE启动子驱动表达的慢病毒载体转导表达tTS/rtTA的稳转株。转导后48小时，对添加多西环素（+Dox）和不添加多西环素（-Dox）的细胞进行EGFP表达检测。

此外我们的在线“学习中心”包含丰富的学习资源，可帮助您安排并实施您的Tet基因诱导表达实验。