hSpCas9 IVT mRNA

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试验验证

图1 hSpCas9 IVT mRNA在体外的基因编辑效果。（A）向表达EGFP的HEK293T细胞转染打靶RGFP的gRNA以及经过N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰的hSpCas9 IVT mRNA。（B）通过显微镜（100X）观察无转染的（NC）以及转染的两组细胞。（C）流式细胞术定量检测荧光强度。（D）转染后48或72 h，转染后的细胞相对NC减少了约40%的EGFP表达量。（E和F）基因编辑效果通过T7E1酶切（E）和Sanger测序确认（F）。高亮表示的腺嘌呤表明了在靶序列的插入突变。

图2 云舟生物开发的HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA具有很高的表达和编辑效率。使用1 ug hSpCas9 IVT mRNA和经过密码子优化的HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA分别转染HEK293T细胞。转染后24 h，对以上两组实验组与非处理对照（NC）进行（A）Western blot分析，并对（B）Cas9相对表达水平进行标准化定量。（C）使用1,000 ng gRNA与指示剂量的hSpCas9 IVT mRNA、HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA分别共转染HEK293T细胞。转染后24 h，T7E1酶切法检测基因编辑效率。蓝色星号所指为完整的PCR扩增子，粉色箭头指所指为T7E1酶切产生的片段。