服务详情
无细胞蛋白合成系统的工作流程从表达载体的设计和构建开始,该载体将用作CFPS中的模板。裂解大肠杆菌细胞,收集粗提取物。含有必要细胞器的裂解液将进一步处理,并补充必要的组分,如能量分子、氨基酸和DNA或mRNA模板,然后启动体外转录和翻译过程以进行蛋白质合成。从体外翻译合成蛋白质到蛋白质纯化以及QC的过程最快可在1天内完成。
运输与存储
我们的载体默认以E. coli甘油菌形式交付。根据需求,我们也可以交付质粒DNA,并收取一定的额外费用。我们大部分重组蛋白以冻结的液体形式交付,并以干冰形式运输。接收到重组蛋白后,请将其存储于-20°C到-80°C的无菌容器。存储妥当的重组蛋白通常可稳定保存一年。同时,我们建议对接收到的重组蛋白进行分装以避免反复冻融。
质量控制
云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制(QC)。对于大多数系统,默认的质量控制包括:(1)酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体;(2)通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。
额外QC项目 | 方法 |
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内毒素检测 | LAL |
蛋白鉴定 | Western Blot |
Intact MS (reduced) |
SEC-HPLC |
SEC-MALs |
蛋白N端测序 |
宿主蛋白检测 |
标签去除 | 蛋白酶消化n |
动力学和亲和性分析 | Octet |
Biacore |
针对啮齿类动物的病原体检测 |
技术详情
案例研究
图1 (A)利用无细胞蛋白合成系统高通量生产的VHH。SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量,纯度≥90%。(B)利用无细胞系统合成的scFv。SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量,纯度≥90%。