腺病毒

腺病毒载体（Adenovirus）能够携带大片段外源DNA、感染分裂细胞和非分裂细胞、诱导体液和细胞免疫应答（这对于疫苗开发是有益的）、表现出高效率的转导和高水平的转基因表达、不整合细胞DNA（在细胞内保持dsDNA游离体）。这些特性使腺病毒作为用于基因治疗的转基因载体、疫苗载体和溶瘤病毒疗法中使用的载体。我们开发出一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺病毒包装工艺水平。

定制病毒，按照定制规格交付

对照病毒，按照定制病毒的规格对应选购

• 超纯化病毒小量制备: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超纯化病毒中量制备: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超纯化病毒大量制备: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

定制病毒，按照定制规格交付

对照病毒，按照定制病毒的规格对应选购

• 超纯化病毒小量制备: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超纯化病毒中量制备: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超纯化病毒大量制备: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

我们的腺病毒制造过程如下（图1）。携带目的基因（GOI）的腺病毒载体首先需要通过PacI限制性消化进行线性化。线性化的载体DNA被转染到表达腺病毒基因E1的包装细胞中以产生重组腺病毒。腺病毒颗粒被释放到组织培养基中，然后进行收集。对于超纯化腺病毒（体内应用级别），病毒颗粒通过氯化铯（CsCl）梯度超速离心进一步纯化和浓缩。我们使用基于免疫细胞化学的方法通过检测腺病毒特异性六聚体蛋白来测量病毒滴度。对于超纯化腺病毒，我们通过测量病毒颗粒的光密度（根据OD260数值）来估算滴度。

图1 Ad5腺病毒的典型生产流程

对于我们生产的腺病毒，其质量控制包括滴度测定、针对细菌和真菌的无菌测试以及支原体检测等。如果腺病毒载体编码了一个荧光蛋白，我们还会进行转导测试以检测荧光表达情况。此外，对于超纯化腺病毒，我们会例行检测内毒素水平。如果您需要该结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。根据需求，我们也可以提供额外的QC服务。

如果您需要了解哪一种腺病毒最适合您的实验需求，请参照我们的常见问题解答。

我们的Ad5/F35腺病毒制造过程如下（图2）。携带目的基因（GOI）的Ad5/F35腺病毒转移质粒首先需要通过PacI限制性消化进行线性化。该线性化的质粒DNA被转染到表达腺病毒基因E1的包装细胞中以产生重组腺病毒。腺病毒颗粒被释放到组织培养基中，然后进行收集。对于超纯化Ad5/F35腺病毒（体内应用级别），病毒颗粒通过氯化铯（CsCl）梯度超速离心进一步纯化和浓缩。我们使用基于免疫细胞化学的方法通过检测腺病毒特异性六邻体蛋白来测量病毒滴度。对于超纯化Ad5/F35腺病毒，我们通过测量病毒颗粒的光密度（根据OD260数值）来估算滴度。

图2 Ad5/F35腺病毒的典型生产流程

我们生产的Ad5/F35腺病毒的质量控制包括滴度测定、针对细菌和真菌的无菌测试以及支原体检测等。如果腺病毒载体编码了一个荧光蛋白，我们还会进行转导测试以检测荧光表达情况。此外，对于超纯化腺病毒，我们会例行检测内毒素水平。如果您需要该结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。根据需求，我们也可以提供额外的QC服务。

Ad5腺病毒对比嵌合型Ad5/F35腺病毒

尽管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的应用中最常用的病毒类型，与之相关的一个主要的限制是其感染靶细胞的能力依赖于柯萨奇病毒和腺病毒受体（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表达不足的宿主细胞将不能被Ad5腺病毒有效转导。Ad5/F35腺病毒则通过整合了一种由腺病毒血清型35（Ad35）的头部和茎部以及Ad5的尾部构成的嵌合纤突蛋白帮助克服了这一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纤突蛋白结合非CAR类型受体CD46的能力，使病毒颗粒附着靶细胞。由此Ad5/F35腺病毒可轻松转导CAR阴性细胞或CAR表达水平低的细胞，也可以转导具有高水平的CAR表达的CAR阳性细胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型设计在拓展腺病毒载体的宿主范围方面发挥了重要作用，使其能够转导那些用传统Ad5腺病毒转导效率低下的细胞系，如造血细胞、原始干细胞、血管平滑肌细胞和CAR阴性的肿瘤细胞。

如果您需要了解哪一种腺病毒最适合您的实验需求，请参照我们的常见问题解答。

我们的gutless腺病毒制造过程如下（图3）。一个由启动子驱动表达目的基因（GOI）的表达盒首先被克隆至我们的gutless腺病毒载体的两个ITR之间。该载体还插入了一段stuffer序列以保证两个ITR之间的序列长度大于28 kb，这是促进高效的病毒包装所必需的。经过限制性消化，两侧是ITR的序列片段从质粒上释放。使用该片段转染包装细胞，后续再转导辅助病毒以产生重组腺病毒颗粒。我们的gutless腺病毒包装系统使用了一种包装信号两侧为LoxP位点的辅助病毒以及稳定表达Cre重组酶的包装细胞。该Cre重组酶介导了辅助病毒的包装信号序列切除，从而防止辅助病毒基因组与gutless腺病毒基因组同时被包装进病毒颗粒。腺病毒颗粒最后被释放到组织培养基中，然后进行收集。

对于超纯化gutless腺病毒（体内应用级别），病毒颗粒通过氯化铯（CsCl）梯度超速离心进一步纯化和浓缩。我们通过测量病毒颗粒的光密度（根据OD260数值）来估算滴度。

图3 Gutless Ad5腺病毒的典型生产流程

对于我们生产的腺病毒，其质量控制包括滴度测定、针对细菌和真菌的无菌测试以及支原体检测等。如果腺病毒载体编码了一个荧光蛋白，我们还会进行转导测试以检测荧光表达情况。此外，对于超纯化腺病毒，我们会例行检测内毒素水平。如果您需要该结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。根据需求，我们也可以提供额外的QC服务。

Gutless腺病毒对比Ad5和Ad5/F35腺病毒的优势

Gutless腺病毒载体（即辅助病毒依赖型腺病毒载体）是最新一代的腺病毒载体，且对比传统腺病毒载体具有多种优势。Gutless腺病毒载体除了只保留对病毒复制和包装必不可少的顺式作用元件外，几乎不含有任何病毒序列，这使其在体内应用时可以最小化免疫原性并延长了转基因表达时长。因此，与Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有显著改善的安全性特征，对于基因治疗应用是极具吸引力的候选工具。此外，缺乏病毒编码序列使得该种载体的装载量可达33 kb，非常适合表达长的或多个转基因。

如果您需要了解哪一种腺病毒最适合您的实验需求，请参照我们的常见问题解答。

我们的gutless Ad5/F35腺病毒制造过程如下（图4）。一个由启动子驱动表达目的基因（GOI）的表达盒首先被克隆至我们的gutless腺病毒载体的两个ITR之间。该载体还插入了一段stuffer序列以保证两个ITR之间的序列长度大于28 kb，这是促进高效的病毒包装所必需的。经过限制性消化，两侧是ITR的序列片段从质粒上释放。使用该片段转染包装细胞，后续再转导辅助病毒以产生重组腺病毒颗粒。我们的gutless腺病毒包装系统使用了一种包装信号两侧为LoxP位点的辅助病毒以及稳定表达Cre重组酶的包装细胞。该Cre重组酶介导了辅助病毒的包装信号序列切除，从而防止辅助病毒基因组与gutless腺病毒基因组同时被包装进病毒颗粒。腺病毒颗粒最后被释放到组织培养基中，然后进行收集。

对于超纯化gutless腺病毒（体内应用级别），病毒颗粒通过氯化铯（CsCl）梯度超速离心进一步纯化和浓缩。我们通过测量病毒颗粒的光密度（根据OD260数值）来估算滴度。

图4 Gutless Ad5/F35腺病毒的典型生产流程

对于我们生产的腺病毒，其质量控制包括滴度测定、针对细菌和真菌的无菌测试以及支原体检测等。如果Ad5F35腺病毒载体编码了一个荧光蛋白，我们还会进行转导测试以检测荧光表达情况。此外，对于超纯化腺病毒，我们会例行检测内毒素水平。如果您需要该结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。根据需求，我们也可以提供额外的QC服务。

如果您需要了解哪一种腺病毒最适合您的实验需求，请参照我们的常见问题解答。

Gutless Ad5/F35腺病毒对比gutless Ad5和传统腺病毒的优势

我们的Ad5/F35 gutless腺病毒载体结合了gutless腺病毒和Ad/F35腺病毒的各自优点，具有更低的免疫原性、更长时间的转基因表达、更大的装载容量以及更广的宿主范围。

Gutless腺病毒载体（即辅助病毒依赖型腺病毒载体）是最新一代的腺病毒载体，且对比传统腺病毒具有多种优势。Gutless腺病毒载体除了只保留对病毒复制和包装必不可少的顺式作用元件外，几乎不含有任何病毒序列，这使其在体内应用时可以最小化免疫原性并延长了转基因表达时长。因此，与Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有显著改善的安全性特征，对于基因治疗应用是极具吸引力的候选工具。此外，缺乏病毒编码序列使得该种载体的装载量可达33 kb，非常适合表达长的或多个转基因。

尽管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的应用中最常用的病毒类型，与之相关的一个主要的限制是其感染靶细胞的能力依赖于柯萨奇病毒和腺病毒受体（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表达不足的宿主细胞将不能被Ad5腺病毒有效转导。Ad5/F35腺病毒则通过整合了一种由腺病毒血清型35（Ad35）的头部和茎部以及Ad5的尾部构成的嵌合纤突蛋白帮助克服了这一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纤突蛋白结合非CAR类型受体CD46的能力，使病毒颗粒附着靶细胞。由此Ad5/F35腺病毒可轻松转导CAR阴性细胞或CAR表达水平低的细胞，也包括具有高水平的CAR表达的CAR阳性细胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型设计在拓展腺病毒载体的宿主范围方面发挥了重要作用，使其能够转导那些用传统Ad5腺病毒转导效率低下的细胞系，如造血细胞、原始干细胞、血管平滑肌细胞和CAR阴性的肿瘤细胞。