自扩增RNA(saRNA)具有RNA分子自我扩增的能力,其表达量比传统mRNA更高,表达时间也更长。这种能力是通过在RNA结构中整合病毒序列(编码复制酶和复制子元件)来实现的,并促使RNA以RNA依赖的方式自我复制。由于saRNA产生显著免疫反应所需的剂量远低于mRNA,该项技术正迅速被应用于下一代RNA疫苗的研发,此外,saRNA还是蛋白替代疗法中的一种非常有潜力的药物候选。saRNA的序列优化和生产过程与mRNA类似。云舟生物专门从事各种应用的高质量saRNA的设计和生产。
亮点
![fast-TAT-from-cloning-to-LNP-encapsulation](https://s.vbapp.net/d8044d107c5e2b40dee97a52f2bce612bedc4284/fast-TAT-from-cloning-to-LNP-encapsulation.png)
从载体克隆到LNP封装快至5周
![sequence optimization](https://s.vbapp.net/2fa4cf0116f9888bd42441a52f83701de9b1c303/codon%20optimization.png)
独有的序列优化技术,提升表达水平
![Experts-in-RNA-development](https://s.vbapp.net/4b34c7ade44046937f07c98a3899012ebab21748/Experts-in-RNA-development.png)
高度专业的团队为你的saRNA进行设计与优化,以取得最佳的表达量、产量和质量
服务详情
- 预制saRNA产品
- 治疗性IVT RNA开发:IVT载体设计和克隆、IVT RNA生产和纯化
- LNP封装:标准配方、定制配方、抗体偶联LNP
- CDMO服务:工艺开发、GMP生产、灌装
技术详情
saRNA复制机制
saRNA的自扩增能力依赖于其第一个开放阅读框编码的复制酶。如图1所示,从saRNA中翻译出的非结构蛋白(nsP)基因,其序列来源于甲病毒(Alphavirus),可形成多蛋白复制复合物(复制酶)负责RNA复制。其中,nsP1具有甲基转移酶和鸟嘌呤转移酶活性,扮演加帽酶的角色,而nsP2则是一种RNA解旋酶,并具有三磷酸酶活性。nsP3介导蛋白质-蛋白质相互作用。nsP4是一种RNA依赖的RNA聚合酶。复制酶复合物合成作为下游RNA复制模板的全长负链RNA。此外,保守序列元件(CSE)被放入转基因的5' 和3' 非翻译区(UTR),以实现复制酶介导的转基因扩增和转录。
由于复制酶基因的加入增大了的分子长度,saRNA在体外通常比传统mRNA更难生产。特别是对于一条高效的saRNA生产线,确保产物的高一致性和高质量是极具挑战性的。云舟生物对saRNA生产线投入了大量研发资源,该生产线还可以根据您的项目需求进行调整和定制。
![Mechanism_of_saRNA_replication.jpg](https://s.vbapp.net/916c11b9f66d7ea9478772ae80e0a41501ad3cbb/Mechanism%20of%20saRNA%20replication.jpg)
图1 saRNA的复制机制。
试验验证
![IVTsaRNA expression in HEK293T cells.jpg](https://s.vbapp.net/c5aa7ffce0af1ba17d25eaab637db95c49952de3/EGFP-saRNA.jpg)
图2 表达EGFP的saRNA与mRNA转染HEK293T的效果对比。
![IVT saRNA expression in mice.jpg](https://s.vbapp.net/6b36134fbe4a084cf01b3631180933859d858a62/saRNA%20exhibited%20extended%20expression%20in%20vivo%20compared%20to%20conventional%20mRNA.png)
图3 体内试验表明,saRNA相对mRNA表现出更长的表达时长。30 ug LNP封装的FLuc mRNA与10 ug LNP封装的FLuc saRNA对比表达效果,传统mRNA在48 h后无法检测到表达,而saRNA在肌肉注射后的表达可维持至少8天。
不同类型IVT RNA的比较
| mRNA | circRNA | saRNA |
结构 | 线性分子,通常包含5’ 帽子、5’ UTR、GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴 | 环状分子,通常包含IRES元件和GOI的ORF | 线性分子,通常包含5’ 帽子、5’ UTR、复制酶和GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴 |
帽子 | 需要5’ 帽子维持RNA稳定性并招募核糖体 | 没有帽子结构,采用IRES元件招募核糖体 | 需要5’ 帽子维持RNA稳定性并招募核糖体 |
RNA长度(nt) | 100 ~ 10,000 | 1,000 ~ 5,000 | 7,000 ~ 10,000 |
稳定性 | 相对低 | 高 | 相对低 |
是否可以在生产时引入修饰核苷? | 是 | 通常不添加修饰 | 是 |
表达水平 | 相对低 | 中 | 高 |
表达时长 | 相对短 | 中 | 长 |
免疫原性 | 相对低 | 中 | 高 |
文档
使用说明书
IVT mRNA的体外应⽤
LNP-mRNA的体内应用
手册与宣传单
RNA:从设计到疗法
mRNA基因递送解决方案
EGFP与HiExpress萤火虫荧光素酶IVT mRNA
MSDS
RNA
LNP-mRNA
品质检验证书(COA)
检索COA